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这里有两种主要的方法。较早的硫代巴比妥酸方法(或其变体)现在用得不多。这是一种化学方法,可测量与血红蛋白结合的葡萄糖总量。结果可以表示为每摩尔血红蛋白或血红素的葡萄糖或果糖胺的摩尔数,并使用校准图转换成%HbA1c。这一类更流行的方法是硼酸盐亲和程序。这使用苯基硼酸酯连接到惰性树脂上。苯基硼酸酯结合顺式羟基,例如与血红蛋白相连的葡萄糖。血液通过硼酸盐亲和柱,导致糖化血红蛋白与树脂结合,未糖化血红蛋白被直接洗脱。使用竞争性硼酸盐结合化合物如山梨糖醇将结合的糖化级分从柱中释放出来。确定糖化血红蛋白与总血红蛋白的比例,并将其乘以由校准图或公式确定的因子,将其转换为%HbA1c。假定这个比例是恒定的。换言之,天然(体内)糖化的模式被认为对于所有患者和糖基化水平是相同的。该方法将给每个分子连接两个葡萄糖的血红蛋白作为每个分子具有一个葡萄糖的血红蛋白的HbA1c结果相同。相比之下,硫代巴比妥酸法将测量具有2个连接的葡萄糖残基的血红蛋白的量是具有一个葡萄糖的血红蛋白的两倍。