离子交换高效液相色谱法分析HbA1c

当葡萄糖在βN-末端结合形成HbA1c时，血红蛋白分子发生构象变化，导致分子呈现额外的负电荷。这意味着在离子交换色谱系统中，它将从正常血红蛋白（HbA0）和通常与HbA0共洗脱的赖氨酸侧链糖基化的血红蛋白中分离出来。

通过对色谱方法和仪器（HPLC）的改进，血红蛋白被常规分离成许多峰，如HbA1a，HbA1b，HbF（胎儿血红蛋白），HbA1c，HbA0，HbA2和一些与其他分子反应产生的血红蛋白产物谷胱甘肽，尿素，阿司匹林等）。

还有一些血红蛋白降解产物出现在已老化的样品中。在一些HPLC系统中，这些可能与HbA1c共洗脱或不完全分离。在这些情况下，获得的HbA1c值可能会高于实际值。新鲜血液样品含有大量不稳定的HbA1c，这些HbA1c在一些较早的分析仪中通过预孵育步骤被除去。较新的分析仪将不稳定形式与稳定的HbA1c分开，不需要预先孵育样品。

使用离子交换HPLC的平台包括BioRad D-10，Diastat，Variant，Variant II和Variant Turbo; TOSOH 2.2 Plus，G7，G8，Menarini Arkray Adams HA 8160.HbA1c对照的完整性对于这些方法更为关键，因为任何降解都会导致可能与HbA1c共洗脱（和共同整合）的干扰峰的增加。由于这个原因，对于这些方法可用的重构或开瓶时间可能小于免疫测定程序。